До найбільш широко застосовуваним хімічним тестів для визначення жовчних пігментів в сироватці відноситься реакція Ван-ден-Берга. При цій реакції пігменти білірубіну під впливом сульфаниловой кислоти втрачають азот, хромогенні продукти визначаються калориметричних. За допомогою реакції Ван-ден-Берга можна відрізнити непрямий білірубін від прямого в зв'язку з різною розчинністю цих пігментів. Якщо реакція відбувається у водному середовищі, то реагує тільки водорозчинний прямий білірубін (так звана пряма реакція Ван-ден-Берга). Якщо ж вона відбувається в метанол е, то внутрішньо-молекулярні водневі зв'язку непрямого білірубіну розриваються; таким чином, реакція як прямого, так і непрямого білірубіну дозволяє визначити його загальний рівень. Кількість непрямого білірубіну можна розрахувати, якщо з величини, яка визначає загальна кількість білірубіну, відняти величину, визначальну кількість білірубіну, отриману в прямій реакції Ван-ден-Берга.

При прямій реакції Ван-ден-Берга найбільш точними виявляються результати, одержувані при тривалості реакції в 1 хв. Якщо реакція триває довше, то невелика кількість непрямого білірубіну може почати реагувати у водному середовищі. В результаті, якщо реакція триває протягом 30 хв, то у хворого з гіпербілірубінемією, зумовленої непрямим білірубіном, може бути визначений помилково низький рівень непрямого білірубіну. Це свідчить про те, що отримані при прямій і непрямій реакціях Ван-ден-Берга значення приблизні (це не абсолютні значення).

Найбільш точний метод вимірювання кількості білірубіну в біологічних рідинах полягає у визначенні освіти метилових ефірів білірубіну (лужної метаноліз) і їх концентрації за допомогою високоефективної рідинної хроматографії (ВЕРХ). Дослідження, виконані за допомогою цього методу, показують, що в нормі в плазмі міститься переважно непрямий білірубін і що лише менше 4% від загального білірубіну доводиться на на пряму фракцію. Це підтверджує давно існувала думка про те, що обумовлена \u200b\u200bметодом Ван-ден-Берга невелика величина прямого білірубіну (1-3 мг / л) є хибною, за допомогою цієї реакції визначається підвищена кількість прямого білірубіну, фактично міститься в плазмі в нормі. Метод ВЕРХ також дозволяє визначити, що у хворого з хворобою печінки і білірубінемією, зумовленої прямим білірубіном, в сироватці міститься значна кількість як моно-, так і дікон'югатов. Сумарно основні відмінності у властивостях і реакціях розглянутих пігментів білірубіну представлені в табл. 38-1.

Таблиця 38.1. Основні відмінності між прямим і непрямим білірубіном

1 Ці властивості відносяться до природно утворюється білірубіну IXa. Інші геометричні різновиди і фотоізомери поводяться так само, як прямий білнрубін (див. Текст).

2 Визначається в плазмі в умовах холестазу (див. Текст).

Якісне визначення білірубіну в сечі може здійснюватися за допомогою таблеток «Іктотест» або методом пірнаючої палички. Пінний тест також простий і дозволяє дати якісну оцінку. При енергійному струшуванні нормальної сечі в тест-пробірці піна буде повністю білою, а при вмісті в сечі білірубіну вона набуває жовтого забарвлення. Ця різниця може бути важко вловимих і стає очевидним тільки при безпосередньому-порівнянні зразків нормальної сечі і сечі, в якій міститься білірубін.

В основі освіти білірубіну лежить деградація гема гемоглобіну і інших гемсодержащих білків і ферментів. Гем розпадається до биливердина, який відновлюється в білірубін.

Вільний білірубін токсичний, не розчиняється у воді і циркулює в крові в комплексі з альбумінами. Цей білірубін дає непряму реакцію Ван ден Берга (після осадження альбумінів спиртом), тому називається непрямим.

Непрямий білірубін, будучи пов'язаним з альбумінами, не проходить через неушкоджені мембрани ниркових клубочків і не фільтрується в сечу.

Виведення білірубіну здійснюється з жовчю через кишечник. Білірубін, пов'язаний з альбумінами, доставляється кров'ю в печінку. Білірубін легко проникає через мембрани гепатоцитів, альбуміни залишаються в кровотоці. В гепатоцитах білірубін піддається кон'югації з глюкуроновою кислотою, перетворюючись в білірубінмоно- і диглюкуронід. Освічені білірубінглюкуроніди нетоксичні, легко розчиняються. Вони направляються з жовчю в кишечник для виведення з організму.

З кишечника білірубінглюкуроніди частково надходять в кровотік і, перебуваючи в крові, представлякгг собою фракцію прямого білірубіну, який дає пряму реакцію Ван ден Берга.
Прямий білірубін, на відміну від непрямого, легко проникає через ниркові фільтри і може виділятися з сечею.

У фізіологічних умовах сироватка крові містить приблизно 25% прямого білірубіну (пов'язаного з глюкуроновою кислотою) і 75% непрямого білірубіну (альбумін-білірубіну).

Таким чином, загальний білірубін крові являє собою сумарну кількість непрямого і прямого білірубіну.

У здорових людей в сироватці крові міститься білірубіну 1,7-20,5 мкмоль / л; прямого - 0,4-5,1 мкмоль / л.

Для визначення білірубіну використовується колориметрический метод, основу якого складає реакція Ван ден Берга. Реакція протікає в дві стадії: на першій під впливом соляної кислоти розривається тетрапірроловая ланцюг і утворюються два діпіррола, на другий - обидва діпірролових похідних діазотіруются діазофенілсульфоновой кислотою з перетворенням їх у азобілірубін. Фракційне зміст білірубіну визначається за допомогою модифікованого методу Ван ден Берга, запропонованого Ендрассіком.
Метод прийнятий в якості уніфікованого.

принцип методу

Білірубін вступає в реакцію азосочетанія з диазотированного сульфаниловой кислотою з утворенням розчину азокрасителя. Інтенсивність забарвлення пропорційна вмісту білірубіну і виявляється фотометрически.

Оригінальним методом Ван ден Берга встановлюється лише характер реакції (пряма, непряма, уповільнена), тобто Відзначається переважання у сироватці крові того чи іншого білірубіну. Метод Ендрассіка, Клеггорна і Грофа дає можливість фракційно визначати вміст білірубіну. Він простий, зручний в практиці, не пов'язаний із застосуванням дефіцитних реактивів і є найбільш прийнятним для практичних лабораторій.

Визначення рекомендується приводити відразу ж після забору проб, щоб уникнути окислення білірубіну на світлі. Гемоліз сироватки знижує кількість білірубіну пропорційно присутності гемоглобіну. Отже, сироватка крові не повинна бути гемолізовані ..

Хімічна формула білірубіну IXα

білірубін (Лат. bilis жовч + ruber червоний) - один з жовчних пігментів жовто-червоного кольору.

Хімічний склад молекули білірубіну - C 33 H 36 O 6 N 4. Молекулярна маса - 584,68. У чистому вигляді білірубін являє собою кристалічну речовину, що складається з кристалів ромбоідальная-призматичної форми жовто-оранжевого або червоно-коричневого кольору, важко розчинний у воді.

В основі молекули білірубіну, як і всіх його похідних - чотири піррольних кільця, успадковані від гемоглобіну. Дві гідроксильні групи обумовлюють кислотні хімічні властивості білірубіну і його здатність утворювати солі. Розташування гідроксильних груп має варіанти, основний з яких - їх приєднання до 2 і 3 піррольних кільцям (білірубін IXα).

Хімічні форми білірубіну і їх назви

Традиційно виділяють дві основні хімічні форми білірубіну:

вільний білірубін + глюкуроновая кислота \u003d пов'язаний білірубін

При цьому білірубін може бути пов'язаний з однією молекулою глюкуронової кислоти (моноглюкуронід білірубіну) або з двома (біглюкуронід білірубіну).

Білірубін також поділяють на непрямий і прямий. З давніх-давен склалася практика, що непрямий білірубін ототожнюють з вільним, а прямий - із зв'язаним. Але це не зовсім вірно.

Про відмінність прямого білірубіну і пов'язаного

Справа в тому, що терміни "непрямий" і "прямий" білірубін є не хімічними, а технологічними і відображають результат широко використовується для лабораторної ідентифікації білірубіну. Оскільки вважалося, що непрямий білірубін представлений вільним, а прямий - виключно пов'язаним, то ці терміни використовувалися як взаємозамінні.

Ця проста схема втратила коректність після того, як виявили ще одну хімічну форму білірубіну: біліпротеін, або дельта-білірубін.

Дельта-білірубін бере участь в реакції Ван ден Берга аналогічно пов'язаного білірубіну і враховується в результаті спільно з ним в якості прямого. Тому формула "Прямий білірубін \u003d пов'язаний білірубін" вірна тільки по відношенню до здорових людей, у яких дельта-білірубін практично відсутня. При деяких же хворобливих станах прямий білірубін може на 60-90% складатися з дельта-білірубіну:

прямий білірубін \u003d пов'язаний білірубін + дельта-білірубін

Про властивості і діагностичне значення читайте нижче.

Джерела утворення білірубіну

Практично єдиним джерелом походження білірубіну в організмі є гем.

гем являє собою структуру, що включає, подібно білірубіну, чотири піррольних кільця, а крім того, атом заліза. Гем входить до складу молекул гемоглобіну (Кисень-переносить білка червоних кров'яних тілець), скорочувального м'язового білка міоглобіну і клітинних ферментів цитохромов.

Основний, еритроцитарний потік білірубіну (85% від усієї кількості) формується в процесі утилізації гемоглобіну віджили свій вік (близько 120 днів) еритроцитів крові. Такі еритроцити витягуються з кров'яного потоку і руйнуються головним чином в селезінці, а також в печінці та в кістковому мозку. Підвищення білірубіну еритроцитарного походження буває при гемолізі (так називають масовий розпад еритроцитів).

Інші джерела дають початок т. Зв. шунтового білірубіну, який становить до 15% від усього його кількості. Серед джерел шунтового білірубіну виділяють:

• Дефектні еритроцити і їх незрілі попередники. Такі клітини в результаті постійної відбраковування гинуть незабаром після свого народження, не встигнувши покинути "інкубатор" клітин крові - кістковий мозок. Число таких клітин, і відповідно, кількість шунтового білірубіну різко зростає при деяких спадкових, аутоімунних, пухлинних захворюваннях системи крові. У нормальних же умовах кістковий мозок дає не більше 7% білірубіну.
• Невелика кількість білірубіну утворюється в процесі постійного оновлення і деструкції м'язового білка міоглобіну. Проте, травми, що супроводжуються великим руйнуванням м'язової тканини можуть призвести до короткочасного підвищення рівня білірубіну в крові.
• Незначна частина білірубіну також надходить з усіх тканин організму в результаті розпаду цитохромов і деяких білків, які містять гем, зокрема, пероксидаз.

Як показали денситометричної дослідження із застосуванням міченого радіоактивним ізотопом гліцину, гем, що дає початок шунтового білірубіну, існує не більше 10 днів. У той же час тривалість існування гема нормальних еритроцитів збігається з тривалістю життя самих еритроцитів - 120 днів. Знаючи частку шунтового білірубіну в його загальної концентрації, можна судити про характер хворобливого процесу, проте поки такий аналіз доступний тільки в наукових дослідженнях.

Трансформацією гема в білірубін, крім багатьох інших завдань, зайняті тканинні макрофаги, Що є частиною імунної системи організму. Тканинні макрофаги є у всіх органах, розташовуючись зазвичай в їх сполучної тканини, але переважно вони зосереджені в селезінці, в лімфатичних вузлах, в печінці і в кістковому мозку. Всі тканинні макрофаги ведуть свій родовід від моноцитів, вирощених в кровотворної матриці кісткового мозку, але в різних органах вони спеціалізовані для виконання особливих завдань, а тому мають і особливі назви - наприклад, купферови клітини печінки, гістіоцити селезінки та ін. Раніше систему тканинних макрофагів називали ретикулоендотеліальною системою, але зараз цей термін визнаний застарілим.

• 80% білірубіну виробляють купферови клітини печінки
• решту - макрофаги кісткового мозку і селезінки
• зовсім невелика кількість - гістіоцити сполучної тканини всіх органів

Щодоби в організмі людини піддаються деструкції 2 * 10 8 постарілих еритроцитів. При цьому вивільняється 6-8 г гемоглобіну, з якого, в свою чергу, бере початок 250-350 мкг білірубіну.

Вивільнилися гем поглинається макрофагами, після чого перетворюється за участю внутрішньоклітинного ферменту гемоксигенази в проміжну речовину биливердин. Одночасно від гема отщепляется атом заліза і окис вуглецю. Биливердин, маючи зелений колір, належить до числа пігментних речовин. Крім того, на відміну від білірубіну, він добре розчинний у воді.

На другому етапі розщеплення гема за допомогою ферменту білівердінтрансферази відбувається трансформація биливердина в білірубін - пігментну речовину жовто-оранжевого кольору, нерозчинний у воді. Як відомо, в складі кожної молекули гемоглобіну входять чотири одиниці гема. Відповідно, при розщепленні однієї молекули гемоглобіну утворюються чотири молекули білірубіну і чотири атома заліза.

Як вже говорилося, в якості побічного продукту при руйнуванні вуглецевих зв'язків гема виділяється окис вуглецю (СО), причому це єдина реакція в організмі, яка дає на виході ця речовина. Ця обставина використовується в перспективному методі дослідження: вимірюючи концентрацію окису вуглецю в повітрі, що видихається, можна оцінити швидкість розщеплення гема в організмі.

Послідовним перетворенням гема в зелений биливердин, а потім в жовто-червоний білірубін пояснюється зміна кольору синців після ударів від темно-синього в синьо-зелений, а потім в жовтий.

Спочатку в організмі утворюється тільки вільний білірубін. Пов'язаний же білірубін з'являється пізніше в результаті трансформації вільного білірубіну.

Властивості вільного білірубіну

Отже, в нашому організмі існує постійно діючий конвеєр виробництва вільного білірубіну як частина фізіологічного механізму заміни старих еритроцитів крові. Це породжує кілька важко вирішуваних проблем:

• Вільний білірубін - токсична речовина, а тому необхідний надійний механізм його виведення з організму і підтримання його концентрації на безпечно низькому рівні. Токсичність білірубіну проявляється в першу чергу стосовно мозкової тканини. Навіть помірно підвищений рівень вільного білірубіну проявляється невираженими симптомами з боку нервової системи: ослаблення уваги, стомлюваність і ін. Втім, у дорослих концентрація вільного білірубіну ніколи не досягає настільки небезпечного рівня, щоб спричинити пошкодження нервової системи. А ось у новонароджених таке трапляється. Зокрема, імунологічний конфлікт може привести до масивного гемолізу і розвитку т. Зв. "Ядерної" жовтяниці. При цьому вільний білірубін, рівень якого в сироватці крові може підвищитися в десятки разів і досягти 300 мкмоль / л і вище, накопичується в мозковій тканині, викликаючи незворотні зміни в підкіркових ядрах головного мозку.
• Вільний білірубін практично не розчиняється у воді. Оскільки всі біологічні рідини організму є водними розчинами, вільний білірубін неможливо вивести з організму в тому вигляді, в якому він є, не змінивши його хімічної структури.
• Разом з тим вільний білірубін добре розчинний в жирах. Завдяки цій властивості він легко долає фосфоліпідні мембрани т. Н. гематоенцефалічний бар'єр, покликаного захищати мозкову тканину від проникнення в неї численних токсичних речовин, що циркулюють в кров'яному руслі.

У кровоносній руслі вільний білірубін транспортують білки-альбуміни, утримуючи його на своїй поверхні. 1г альбуміну переносить 8,5мг білірубіну. Комплекс альбумін-білірубін неміцний і розпадається при першій можливості.

Реакція Ван ден Берга ідентифікує вільний білірубін в якості непрямого.

Білірубін як антиоксидант

У світлі новітніх досліджень дещо змінилося традиційне уявлення про білірубіну як про однозначно "жужільному" продукті. Вільний білірубін має виражені антиоксидантні властивості, і організм активно їх використовує.

Антиоксидантна активність білірубіну значно вища, ніж у α-токоферолу (вітаміну Е), який вважають класичним антиоксидантом. Так, білірубін інактивує H 2 O 2 в концентрації, яка в 10 разів більше його власної. Зокрема, він перешкоджає перекисного окислення ліпідів клітинних мембран, а також окислення мембранних білків. Найбільш значимі антиоксидантні властивості білірубіну щодо нервової тканини і серцевого м'яза, оскільки ці тканини не мають достатньо потужної власної захистом від вільних радикалів.

Виявилося, що люди з хронічно високим рівнем вільного білірубіну значно рідше хворіють на атеросклероз судин і пов'язаними з ним захворюваннями серця. Доведено обратнопропорциональная залежність між рівнем вільного білірубіну в крові і серцевою патологією.

Одне з досліджень, що охопило 10000 пацієнтів, довело нижчу смертність від пухлинних захворювань серед людей з високим рівнем вільного білірубіну.

У світлі цих даних виглядає доцільною трансформація добре розчинної у воді биливердина в "незручний" нерозчинний білірубін.

Перетворення вільного білірубіну в пов'язаний

Оскільки, як уже сказано вище, вільний білірубін розчиняється в воді, його виведення з організму неможливо без попередньої трансформації в інші, водорозчинні речовини.

Конкретним місцем такої трансформації є основна структурна одиниця печінки - печінкова клітина, або гепатоцит. Гепатоцити зібрані в печінкові часточки. Печінкова часточка влаштована таким чином, що кожна печінкова клітина з одного боку має контакт з венозним кровоносних капілярів (т. Н. Синусоїди), а з іншого до неї підведено жовчний капіляр.

Вільний білірубін, що транспортується на поверхні альбуміну, з венозної крові синусоїда переміщається спочатку в простір Діссе, що розділяє капіляр і печінкову клітку, а потім через клітинну мембрану всередину гепатоцита, одночасно звільняючись від зв'язку з альбуміном. Таке переміщення відбувається без витрати енергії завдяки перепаду концентрації.

Усередині клітини білірубін з'єднується оборотної зв'язком з білками-лигандин. Лигандин перешкоджають "втечі" білірубіну назад в венозний капіляр, а також надсилає його в сітчасту структуру - ендоплазматичнийретикулум.

В ЕПР є т. Н. мікросоми - пухирці, наповнені ферментами. На поверхні мікросом при каталітичному участю ферменту глюкуронілтрансферази відбувається реакція сполуки вільного білірубіну з глюкуроновою кислотою, в результаті чого з'являється нова речовина - пов'язаний, або кон'югований білірубін.

Дана реакція може проходити в один або два циклу, даючи на виході відповідно моноглюкуронід або біглюкуронід білірубіну. Співвідношення моноглюкороніду і біглюкуроніда становить 4: 1.

Глюуронізація білірубіну є одним з найбільш "вузьких місць" у його метаболізмі, оскільки вона лімітована кількістю ферменту глюкуронілтрансферази. Ця кількість різко знижений (менше 1-3% від норми) при деяких спадкових захворюваннях, зокрема при.

Утруднене виділення зв'язаного білірубіну в жовч веде до його накопичення в крові. У таких випадках нирки змушені взяти на себе функцію його виведення з організму, хоча в нормальних умовах вони цього не роблять. Поява в сечі білірубіну є ознакою серйозного захворювання.

Властивості пов'язаного білірубіну

Пов'язаний білірубін своїми властивостями вигідно відрізняється від вільного:

• він нетоксичний
• добре розчинний у водних середовищах
• легко виводиться з організму, переважно з жовчю, а при необхідності і з сечею.

Пов'язаний білірубін бере участь у прямій реакції Ван ден Берга, тому його зазвичай називають прямим білірубіном.

Слід зазначити і погане властивість пов'язаного білірубіну: при його надмірної концентрації в жовчі він схильний до кристалізації і до утворення білірубінові каменів в жовчному міхурі. Оскільки висока концентрація зв'язаного білірубіну є наслідком підвищеного освіти в організмі вільного білірубіну, то причинами таких станів зазвичай бувають і інші забалеванія системи крові.

Про вирішальну роль печінки в метаболізмі білірубіну

Таким чином, єдиним органом в людському організмі, здатним здійснити перетворення вільного білірубіну в пов'язаний, є печінка.

Вирішальна роль печінки в метаболізмі білірубіну ще більш очевидна, якщо взяти до уваги, що 80% вільного білірубіну також виробляється в печінці купферови клітинами. Рівень білірубіну є одним з найбільш надійних індикаторів функціонального стану печінки, оскільки майже весь процес обміну білірубіну знаходиться в тісному залежності від цієї функції.

Турбота про утилізація білірубіну не випадково покладено на печінку, яку по праву називають головною хімічною лабораторією організму. Печінка перетворює на нетоксичні хімічні форми величезна кількість речовин, як природно утворюються в організмі, так і потрапляють в нього ззовні, в тому числі і лікарських речовин.

Деякі кінцеві продукти метаболізму переважно виводяться з організму через нирки з сечею, інші - через печінку з жовчю. Який з двох шляхів кращий для кожного конкретного речовини - це обумовлено особливостями його хімічної будови і фізіології печінки і нирок. Загальний принцип такий: нирки добре виводять речовини з молекулярною масою менше 300 у. е., інші виводяться головним чином з жовчю, в їх числі і білірубін.

Слід сказати, що для переробки білірубіну печінкова клітина використовує універсальні ферментні системи, які поряд з білірубіном беруть участь у метаболізмі багатьох інших речовин. Поряд з економією ресурсів організму така ситуація іноді призводить і до негативних наслідків. Справа в тому, що ряд речовин, зокрема багато лікарських препаратів конкурують з білірубіном в ферментативних реакціях і при передозуванні здатні повністю витестіть останній з метаболічного процесу. Це призводить до накопичення непрямого білірубіну в організмі і до розвитку т. Зв. "Некон'югованій" жовтяниці. До числа таких препаратів належить парацетамол і деякі інші нестероїдні аналгетики, деякі антибіотики.

Пов'язаний білірубін виділяється з гепатоцита в жовчний капіляр і виводиться з жовчю в кишечник. Виділення пов'язаного білірубіну в жовчний капіляр вимагає витрати енергії, тому пошкодження печінкових клітин при гепатитах, цирозах і ін. Призводить до розладу цього процесу.

Трансформація білірубіну в кишечнику і її продукти

Таким чином, зв'язаний білірубін виділяється з потоком жовчі в кишечник. Саме білірубін надає жовчі брудно-зелений відтінок.

Оскільки мешкають в кишечнику мікроорганізми активно працюють над його змістом, білірубін також валиться подальшої трансформації. У процесі переробки білірубіну в кишечнику утворюються численні проміжні речовини. Процес переробки білірубіну в кишечнику є багатоетапним і відбувається з утворенням численних проміжних речовин.

Основні етапи кишкової трансформації:

• Під впливом бактеріального ферменту β-глюкуронідази кон'югований білірубін піддається гідрозізу (розщепленню) з утворенням вільного білірубіну
• Вільний білірубін в результаті серії реакцій відновлення трансформується в цілий ряд речовин під загальною назвою "Уробіліноген", або "Уробіліноіди". В основі уробіліногенов, як і білірубіну, знаходиться структура з чотирьох піррольних кілець. Уробіліноген безбарвні.

У числі уробіліногенов найважливішими є такі речовини:

• мезобіліноген - родоначальник групи уробіліногенов
• стеркобіліноген
• власне уробилиноген

Велика частина уробіліногенов в результаті трансформується в кінцеві пігментні продукти - стеркобилин і уробилин, які мають оранжево-коричневий колір. Саме ці речовини надають фекалиям характерний колір. Знебарвлення фекалій свідчить про відсутність в них білірубіну, що буває при гепатитах або при перекритті жовчовивідних шляхів. 10-20% уробіліногенов всмоктуються з кишечника і через систему ворітної вени повертаються в печінку. Печінка ж робить з ними те, що вміє: переводить в зв'язаний білірубін і відправляє назад в кишечник. У нормі не більше 2-5% уробіліногенов виводяться із сечею. Така невелика кількість не виявляється при звичайному лабораторному дослідженні сечі.

При гепатитах печінка не справляється з утилізацією уробіліногенов, внаслідок чого вони виявляються в сечі. - важлива діагностична ознака захворювань печінки.

Реакція Ван ден Берга і інші методи визначення білірубіну

Настав час пояснити походження кілька дивних назв: "прямий" і "непрямий" білірубін. А названі так дві форми білірубіну з легкої руки пана Ван ден Берга (Van Den Berg), який розробив ще в 1916 році реакцію ідентифікації білірубіну в сироватці крові за допомогою реактиву Ерліха. Після 100 років реакція, названа на його честь реакцією Ван ден Берга, залишається в лабораторній практиці основним методом дослідження вмісту білірубіну.

Аби не заглиблюватися в деталі методики, яка за сотню років зазнала численних модифікацій, відзначимо її принципову особливість - двоетапність виконання:

• Перший етап (Пряма реакція Ван ден Берга): В пробірку з досліджуваної сироваткою крові додають реактив Ерліха Незабаром при наявності в сироватці пов'язаного білірубіну вміст пробірки набуває яскраво-рожевий колір. Вільний білірубін, блокований альбуміном, не приймає участі в реакції. За допомогою колориметрического приладу по інтенсивності забарвлення можна визначити кількісний вміст зв'язаного білірубіну. Таким чином, зв'язаний білірубін, який бере участь у прямій реакції, названий "прямим" билирубином.
• Другий етап (Непряма реакція Ван ден Берга): В іншу пробірку з досліджуваної сироваткою спочатку додають речовину, облягати альбуміни. В оригінальному виконанні Ван ден Берга з цією метою використовувався 96˚ етиловий спирт. Надалі етиловий спирт був замінений на більш ефективні речовини. Альбумін при цьому осідає на дно пробірки, а розблокований вільний білірубін набуває здатності вступати в хімічну реакцію з реактивом Ерліха, що він і робить. Одночасно з непрямим білірубіном в реакції бере участь і прямий білірубін (якщо він є), тобто непряма реакція Ван ден Берга визначає загальний білірубін як суму прямого і непрямого білірубіну. Вміст непрямого білірубіну обчислюють як різницю загального і прямого білірубіну:

  непрямий білірубін \u003d загальний білірубін - прямий білірубін

Реакція Ван ден Берга, поряд з незаперечними перевагами, в числі яких простота виконання і наочність результату, має і суттєвий недолік - вона дає підвищений вміст прямого білірубіну. Так, в сироватці здорових людей цей метод виявляє до 5,4 мкмоль / л прямого білірубіну, який становить до 25% від загального. Насправді, як показують більш точні методи, у цих людей загальний білірубін майже на 100% представлений непрямим, а прямий практично відсутня. Втім, в клінічній практиці важливіше знати не зміст білірубіну саме по собі, а його динаміку, для чого необхідно забезпечити порівнянність результатів, отриманих в різний час і в різних лабораторіях.

• α - вільний білірубін
• β - моноглюкуронід білірубіну
• λ - біглюкуронід білірубіну

Розроблено та інші методи виявлення білірубіну, докладний опис яких виходить за рамки цієї статті:

• спектрофотометрія
• газоаналізатор
• високоефективна рідинна хроматографія
• неінвазивний метод - рефлективна денситометрія

Серед названих методів найбільш перспективна високоефективна рідинна хроматографія. Дана методика дозволяє визначити зміст чотирьох фракцій білірубіну:

• α - вільний білірубін
• β - моноглюкуронід білірубіну
• λ - біглюкуронід білірубіну
• δ - дельта-білірубін, або біліпротеін

Дельта-білірубін

Дельта-білірубін являє собою з'єднання кон'югованого білірубіну (біглюкуроніда або моноглюкороніду білірубіну) з альбуміном. У науковій літературі часто використовують і іншу назву цієї речовини: "біліпротеін". Ця речовина жовтого кольору.

Реакція Ван ден Берга не дозволяє окремо визначити дельта-білірубін і ідентифікує його спільно з глюкуронідами білірубіну в якості прямого, оскільки всі ці речовини вступають в пряму реакцію з реактивом Ерліха аналогічним чином. Для селективного визначення його змісту в сироватці крові використовують високоефективну рідинну хроматографію.

В біохімічному і фізіологічному аспектах дельта-білірубін має низку особливостей, які в цілому дозволяють розглядати його поряд з вільним і зв'язаним білірубіном як самостійну, третю форму білірубіну:

• На відміну від комплексу альбуміну з вільним білірубіном, дельта-білірубін є досить стійким речовиною, оскільки його компоненти необоротно пов'язані міцної ковалентного хімічним зв'язком.
• Синтез молекули дельта-білірубіну не вимагає участі внутрішньоклітинних елементів, тому можливий in vivo і in vitro, т. Е. Як в організмі, так і в пробірці.
• Дельта-білірубін нетоксичний для тканин організму.
• Через надмірну масивності своєї молекули дельта-білірубін в незміненому вигляді абсолютно не виводиться з організму ні з жовчю, ні через нирки.
• Встановлено, що період напіврозпаду дельта-білірубіну в організмі такої ж, як і у звичайного альбуміну, і становить 14-21 день. Тільки після руйнування альбуміну з'являється можливість вивести з організму раніше з'єднаний з ним глюкуронід білірубіну, переважно з жовчю.

У нормальних умовах дельта-білірубін не виявляється в значних кількостях. Його зміст різко підвищується при холестазі, т. Е. Порушення вироблення і виділення компонентів жовчі на тлі збереженої функції синтезу кон'югованого білірубіну. Холестаз може бути як внутрішньопечінковим при гепатитах і цирозах печінки, так і позапечінкових, обумовленим утрудненням для відтоку жовчі у позапечінкових жовчних шляхах, що зазвичай буває при їх закупорці жовчним каменем.

Зміст дельта-білірубіну при холестазі може досягати 60-70 і навіть 90% від прямого. Завдяки своїй "живучості" в організмі дельта-білірубін (а разом з тим і прямий білірубін в цілому) залишається високим ще протягом 1-1,5 тижнів після нормалізації відтоку жовчі. Цим пояснюється незрозумілий раніше феномен, коли прямий білірубін тривалий час залишається високим, всупереч явного клінічного поліпшення і нормалізації інших лабораторних показників, зокрема.

У той же час не відбувається підвищення вмісту дельта-білірубіну при некон'югованих гіпербілірубінемії (накопичення в крові некон'югованого білірубіну, що буває при, і деяких інших станах).

Люмірубін і інші фотопродукти білірубіну

У своїй звичайній і найбільш стійкою конфігурації молекула білірубіну згорнута таким чином, що одні активні групи блоковані іншими, що і визначає її нерозчинність. Під впливом синього світла білірубін здатний перетворюватися в багато-чисельні фотопродукти, більшість з яких завдяки розблоковані гідроксильних груп добре розчинні у воді

Свого часу хіміки зацікавилися парадоксальною розчинність вільного білірубіну. Теоретично молекула білірубіну завдяки наявності двох гідроксильних груп COOH - повинна володіти вираженою полярністю. Як відомо, речовини з поляризованої молекулою розчинні у воді і нерозчинні в жирах. Насправді вільний білірубін поводиться протилежним чином.

Загадку вдалося розгадати за допомогою рентренокрісталлографіі. З'ясувалося, що молекула вільного білірубіну має таку просторову конфігурацію, в якій поляризующие гідроксильні групи блоковані внутрішніми межводороднимі зв'язками (т. Н. Z-Z зв'язку). Така конфігурація молекули білірубіну найбільш стійка і є основною, оскільки має в своєму розпорядженні мінімумом простору і енергії. Також було виявлено, що поряд з основною конфігурацією існують і численні інші варіанти.

Найбільшого інтересу серед них заслуговують фотопродукти білірубіну, які утворюються під впливом синього світла в присутності атомарного кисню. Молекули білірубіну, поглинаючи енергію фотонів світла, змінюють внутрішні міжатомні Z-Z зв'язку на більш високоенергетичні Z-E і E-E зв'язку. При цьому разом зі зміною просторової конфігурації молекул радикально змінюються і їх властивості - вони стають водорозчинними.

Фотопродукти завдяки гарній водорозчинності швидко виводяться з організму печінкою. Найвищою швидкістю виведення володіє один з фотопродуктов з E-E зв'язками, названий люмірубіном. Фотопродукти відрізняються малою тривалістю життя, оскільки такі молекули при першій нагоді позбавляються від зайвої енергії і повертаються до початкової, основної конфігурації.

Здатність вільного білірубіну утворювати водорозчинні фотопродукти використовують для лікування жовтяниці новонароджених методом фототерапії.

Читайте продовження:

ВАН-ден-Бергу РЕАКЦІЯ

(А. А. Н. Van den bergh, 1869-1943, датський лікар) спосіб якісного і кількісного визначення білірубіну в сироватці крові, заснований на появі червоною або рожевою забарвлення при його взаємодії з диазореактивом Ерліха; кількісне визначення проводиться колориметрически.

Медичні терміни. 2012

Дивіться ще тлумачення, синоніми, значення слова і що таке ВАН-ден-Бергу РЕАКЦІЯ в російській мові в словниках, енциклопедіях і довідниках:

• РЕАКЦІЯ в Словнику економічних термінів:
  (Сленг.) - тут: швидке падіння цін після попереднього ...
• ВАН
  Ван -
• ВАН в Довіднику Персонажів і культових об'єктів грецької міфології:
  титул правителів держав і князівств в Китаї і Кореї в давнину і середні ...
• РЕАКЦІЯ в Медичних термінах:
  (Reactio; ре- + лат. Actio дію; син. Р. Психогенна) в психіатрії загальна назва патологічних змін псіхіческой.деятельності, що виникають у відповідь ...
• РЕАКЦІЯ
  (Від ре ... і лат. Actio - дія) дію, стан, процес, що виникають у відповідь на будь-яке ...
• ДЕН у Великому енциклопедичному словнику:
  (Dehn) Зігфрід Вільгельм (1799-1858) німецький музичний теоретик і педагог. Автор підручників гармонії і контрапункту. У Дена брали уроки М. І. ...
• ВАН у Великому енциклопедичному словнику:
  місто на сході Туреччини, на східному березі оз. Ван, адміністративний центр іля Ван. 153 тис. Жителів (1990). Борошномельна, цементна промисловість. ...
• РЕАКЦІЯ
  Реакція (політ.) - в широкому сенсі позначає громадський рух напрямку різко протилежному попередньому або сучасному, якщо воно викликано його крайнощами. Так ...
• Ден в Енциклопедичному словнику Брокгауза і Евфрона:
  (Dheune) - річка в східній Франції, довжиною в 65 км, русло якої на всіх майже верхній течії входить до складу ...
• ДЕН в Енциклопедичному словнику Брокгауза і Евфрона:
  (Siegfried-Wilhelm Dehn) - відомий німецький музичний теоретик (1796-1858); вивчав спочатку гру на віолончелі, потім теорію композиції під керівництвом Клейна. Великий ...
• ВАН частинок в Енциклопедичному словнику Брокгауза і Евфрона:
  частка, складова іноді приставку до нідерландським прізвищами, виробленим від назви якої-небудь місцевості; часто вона пишеться разом із самою прізвищем. Відповідаючи ...
• ВАН ТУРЕЦЬКИЙ вилайете в Енциклопедичному словнику Брокгауза і Евфрона:
  (Van) - турецька вілайєт в південно-східній Вірменії, звичайно зараховує до Курдистану, складається з санджаків: Ван (з 233 269 жителями), Муш і ...
• ВАН ТИТУЛ в Енциклопедичному словнику Брокгауза і Евфрона:
  (Кит. Ванг, ган, хан), відповідає нашому князь. Титул цей спадковий і має кілька ступенів. Коли з ним зв'язується влада, то ...
• ВАН в Енциклопедичному словнику Брокгауза і Евфрона:
  (Кит., Ванг, ган, хан), відповідає нашому князь. Титул цей спадковий і має кілька ступенів. Коли з ним зв'язується влада, то ...
• Берген в Енциклопедичному словнику Брокгауза і Евфрона:
  (Berga) - гір. в Каталонії, адміністративний центр, 718 м над уровн. моря, на правій притоці р. Льебрегат, 4996 жит., Що займаються ...
• РЕАКЦІЯ
  (Від ре ... і латинського actio - дія), дія, стан, процес, що виникають у відповідь на будь-яке ...
• ВАН в Сучасному енциклопедичному словнику:
  титул правителів держав і князівств в Китаї і Кореї в давнину і середні ...
• РЕАКЦІЯ
  [Латинське re. проти + actio дію] 1) дію, що виникає у відповідь на той чи інший вплив; 2) в біології відповідь ...
• ВАН в Енциклопедичному словничок:
  титул правителів держав і князівств в Китаї і Кореї в давнину і середні ...
• РЕАКЦІЯ в Енциклопедичному словничок:
  I і, ж. 1. Дія, що виникає у відповідь на той чи інший вплив. Позитивна р. на критику. 2. Відповідь організму ...
• РЕАКЦІЯ в Енциклопедичному словнику:
  1, -і, ж. I. см. Реагувати. 2. Перетворення одних речовин в інші (хімічна реакція) або перетворення атомних ядер внаслідок їх ...
• РЕАКЦІЯ
  Реакція осідання еритроцитів, см. РОЕ ...
• РЕАКЦІЯ у Великому російському енциклопедичному словнику:
  РЕАКЦІЯ ВИПРОМІНЮВАННЯ, то ж, що радіаційне тертя ...
• РЕАКЦІЯ у Великому російському енциклопедичному словнику:
  РЕАКЦІЯ політична, активний опір товариств. прогресу в цілях збереження і зміцнення віджилих соціальних ...
• РЕАКЦІЯ у Великому російському енциклопедичному словнику:
  РЕАКЦІЯ (від ре ... і лат. Асtio - дія), дія, стан, процес, що виникають у відповідь на до.-л. ...
• ДЕН у Великому російському енциклопедичному словнику:
  Ів. Ів. (1786-1859), рос. инж.-фортифікатор, инж.-ген. (1843), чл. Держ. ради (1850). З 1831 гл. будівельник фортець в Царстві Польському (під ...
• ДЕН у Великому російському енциклопедичному словнику:
  (Dehn) Зігфрід Вільгельм (1799-1858), ньому. муз. теоретик і педагог. Автор підручників гармонії і контрапункту. У Д. брали уроки М.І. Глінка, ...
• ВАН у Великому російському енциклопедичному словнику:
  Янмін (Ван Шоужень) (1472-1529), кит. філософ-неоконфуціанец, літератор, держ. діяч. Виходив з єдності знання і дії в нравств. поведінці і стверджував, ...
• ВАН у Великому російському енциклопедичному словнику:
  Ейк (van Eyck), нід. живописці, основоположники нід. позовква 15 в., брати: Хуберт (бл. 1370-1426), можливо, почав "Гентський вівтар". Ян (бл. ...
• ВАН у Великому російському енциклопедичному словнику:
  Шухе (210-285), кит. лікар. В кн. "Про пульсі" (т. 1-10, 280) виклав вчення про його диагностич. і прогностіч. значенні. Праця ...
• ВАН у Великому російському енциклопедичному словнику:
  ЧУН (27 - бл. 104), кит. філософ. Осн. соч. "Зважування міркувань" ( "Лунь хен") об'єднує ідеї конфуціанства і даосизму, пройнятий раціоналізмом ...
• ВАН у Великому російському енциклопедичному словнику:
  Хайзе (Van Hise) Чарлз Річард (1857- 1918), амер. геолог. Осн. тр. по докембрію Канадського щита і проблем ...
• ВАН у Великому російському енциклопедичному словнику:
  Флек (Van Vleck) Джон Хазбрук (1899- 1980), амер. фізик. Фундам. тр. з квантової теорії магнетизму і тв. тіла. Ноб. пр. ...
• ВАН у Великому російському енциклопедичному словнику:
  Тігемом Ф.Е.Л., см. Тігем Ф.Е.Л. ...
• ВАН у Великому російському енциклопедичному словнику:
  ТАО (1828-97), один з ідейних попередників реформаторського руху в Китаї (див. "Сто днів реформ"). Перекладач і публіцист. Тр. про ...
• ВАН у Великому російському енциклопедичному словнику:
  Сяонун (1857-1918), кит. актор і драматург. Виступав в разл. т-рах країни. Краща роль - поет Лі Бо в п'єсі "Бродячий ...
• ВАН у Великому російському енциклопедичному словнику:
  Сяньчжі (? -878), один з рук. Хрест. війни 874-901 в Китаї. У 878 його військо розгромлене, сам він ...
• ВАН у Великому російському енциклопедичному словнику:
  Свита (van Swieten) Герард (1700-72), нід. лікар. З 1745 працював у Відні, засновник т.зв. старої віденської школи, ін. поч. ч. ...
• ВАН у Великому російському енциклопедичному словнику:
  МІН (Чень Шаоюй) (1904-74), чл. Політбюро ЦК і секр. ЦК КП Китаю (КПК) в 1931-45. У 1931 виконував обов'язки ген. ...
• ВАН у Великому російському енциклопедичному словнику:
  МАН (45 до н.е.-23 н.е.), імп. Китаю з 9 н.е. (В результаті палацового перевороту). Намагався провести реформи (ліквідація приватної власності ...
• ВАН у Великому російському енциклопедичному словнику:
  -Дер-Ваальса РІВНЯННЯ, запропоноване Й.Д. Ван-дер-Ваальса (1873) ур-ня стану реального газу, що враховує кінцівку обсягу молекул і наявність межмол. ...
• ВАН у Великому російському енциклопедичному словнику:
  -Дер-Ваальса (van der Waals) Йоханнес Дідерик (1837-1923), нід. фізик. Вивів ур-ня стану для реальних газів (ур-ня В. дер В.). ...
• ВАН у Великому російському енциклопедичному словнику:
  Дейк (van Dyck, van Dijck) Антоніс (1599-1641), флам. живописець. Працював також в Італії та Англії. Учень П.П. Рубенса. Віртуозні по ...
• ВАН у Великому російському енциклопедичному словнику:
  Де Грааф ГЕНЕРАТОР, см. Електростатичний генератор ...
• ВАН у Великому російському енциклопедичному словнику:
  ДАММ (Van Damme; наст. Фам. Ван Варенбург, van Varenburg) Жан-Клод (р. 1961), бельг. кіноактор. Живе і працює в США. Чемпіон ...